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哺乳動物細胞培養過程 & 培养条件

導語:哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取,原代培養,傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分爲細胞株培養和細胞系培養。

哺乳動物細胞培養過程
哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取,原代培養,傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分爲細胞株培養和細胞系培養。如下對各個過程進行簡述:
原代培養:從動物機體取出組織後切碎,經過各種酶(常用胰蛋白酶),螯合劑(常用EDTA)結合機械方法(吸液管反複吸吹)處理,分散成單細胞,置于合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。一般把從動物有機體內取出細胞開始培養,到繁殖十代以內的細胞培養稱爲原代細胞培養。

经过原代細胞培養,细胞分裂繁殖,培养物逐渐增多长满培养空间,继而相互之间接触,发生接触抑制现象,生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培養瓶内进行传(继)代培养。
傳(繼)代培養:将原代细胞从培養瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培養瓶中继续培养,称为传(继)代培养。
細胞系:初代培養物開始第一次傳代培養後的細胞,即稱之爲細胞系。如果細胞系的生存期有限,則稱爲有限細胞系。已獲得無限繁殖能力,能持續生存的細胞系稱爲連續細胞系或無限細胞系。
細胞株:從一個經過生物學鑒定的細胞系,用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增值形成的細胞群,稱爲細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原珠形狀不同的細胞群,成爲亞株。

哺乳動物細胞培養條件
不同哺乳動物細胞在各個階段的培養,都需要有基礎的培養條件,歸納如下:
1、無菌無毒的環境:對培養液和所有培養用具無菌處理;培養液中添加抗生素防止培養過程中汙染;定期更換培養液以清除代謝産物,防止對培養細胞造成危害。
2、營養:液體合成培養基包含糖、氨基酸、促生長因子、水、無機鹽、微量元素等;通常還需加入血漿、血清等天然成分
3、適宜的溫度和pH:人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。
4、氣體環境:气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体,CO2维持培养液pH。

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